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干貨分享 | 考馬斯亮藍染色法

瀏覽數(shù)量： 0 作者：本站編輯發(fā)布時間： 2024-08-05 來源：本站

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在蛋白質(zhì)研究中，清晰的蛋白質(zhì)可視化是關(guān)鍵?？捡R斯亮藍染色法是一個經(jīng)典且高效的解決方案，可以快速顯示凝膠中的蛋白質(zhì)條帶，無論是新手還是經(jīng)驗豐富的研究者，都能從中獲益。讓我們一起了解這項實用的染色技術(shù)吧！

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概念

考馬斯亮藍染色法是一種廣泛使用的蛋白質(zhì)染色技術(shù)。它通過亮藍G-250與蛋白質(zhì)的結(jié)合，使蛋白質(zhì)在凝膠中呈現(xiàn)藍色，從而可以在凝膠中可視化蛋白質(zhì)。

分類

考馬斯亮藍染色主要有兩種類型：快速染色和傳統(tǒng)染色?？焖偃旧梢栽?-2小時內(nèi)完成，但靈敏度較低，傳統(tǒng)染色需要更長的時間（通常一夜），但靈敏度更高。

實驗步驟

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01 蛋白質(zhì)電泳

首先通過SDS-PAGE電泳分離蛋白質(zhì)，并根據(jù)蛋白質(zhì)的大小和電荷選擇合適的凝膠和電泳條件。

02 染色

電泳結(jié)束后，將凝膠放入含亮藍G-250染色液的容器中，放在搖床上搖動，確保染色液均勻接觸到凝膠的每一部分?？焖偃旧ǔＰ枰獡u動1小時，傳統(tǒng)染色則需要搖動一夜。

03 去染

將凝膠從染色液中取出，放入去染液中去除多余的染色液，使得背景清晰?？焖偃ト就ǔＰ钃u動30分鐘至1小時，傳統(tǒng)去染則需搖動2-3小時，或直到蛋白質(zhì)條帶清晰可見。

04 觀察與記錄

將凝膠放在顯微鏡下觀察結(jié)果，必要時可用相機或掃描儀記錄結(jié)果。

常用試劑配方

01 染色液配方

a、亮藍G-250：0.1%（w/v）

b、甲醇：50%（v/v）

c、醋酸：10%（v/v）

d、去離子水：余量

e、操作步驟：將亮藍G-250溶解在甲醇中，加入醋酸，再加入去離子水，調(diào)整到最終體積。

02 去染液配方

a、甲醇：40%（v/v）

b、醋酸：10%（v/v）

c、去離子水：余量

d、操作步驟：混合甲醇和醋酸，再加入去離子水，調(diào)整到最終體積。

常見問題與解決方案

問：染色效果不好

答：可能是染色時間不足或染色液配制不當?？梢匝娱L染色時間或檢查染色液配制，確保亮藍G-250濃度和pH值都在正確的范圍內(nèi)。

問：背景過深

答：可能是去染不充分?？煽紤]延長去染時間或更換新鮮去染液。

問：蛋白質(zhì)條帶不明顯

答：可能是蛋白質(zhì)濃度過低或電泳條件不適?？稍黾訕颖镜鞍踪|(zhì)濃度或優(yōu)化電泳條件（調(diào)整電壓或電泳時間）。

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